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重组蛋白L琼脂糖凝胶FF是将重组大消化链球菌蛋白L（Recombinant Peptostreptococcus magnus Protein L，简称r-PPL）偶联在高度交联的琼脂糖凝胶上的一种亲和纯化介质。大消化链球菌蛋白L（PPL）能与抗体的κ轻链结合而不会影响抗体的抗原结合位点，这一特性使其与结合抗体Fc区域的蛋白A、蛋白G相比，能更广泛地结合各种来源及亚类的抗体。如人类的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD，以及含κ轻链（人类1、3、4型，小鼠1型）的Fab、scFv等抗体片段。但不能与重链、λ轻链、κ轻链（2型）结合，所以重组蛋白L琼脂糖凝胶FF不能纯化牛、山羊、绵羊、鸡来源的抗体。

技术指标：

抗体与蛋白A、蛋白G的结合力：

注：-表示不结合；+表示微弱结合；++表示中等结合；+++表示很强结合；NA表示暂无数据。能用于亲和纯化的抗体一般需要中等以上的结合力。

应用举例：

结合缓冲液：20 mM磷酸盐缓冲液（PB），pH 7.4

洗脱缓冲液：0.1 M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，pH 2.7

中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 9.0

1)1 ml重组蛋白L琼脂糖凝胶FF预装柱，用5~10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液；

2)用结合缓冲液平衡 5~10个柱床体积；

3)将3 ml小鼠腹水用结合缓冲液稀释至15 ml，0.45 μm滤膜过滤上样；

4)用结合缓冲液平衡 5~10个柱床体积至基线；

5)用洗脱缓冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和缓冲液调节其pH至中性；

6)每次使用后再用3~5个柱床体积的洗脱缓冲液再生清洗；

7)SDS-PAGE（图1）电泳分析洗脱下来的小鼠单抗纯度在95%以上。

注意事项：

1)预填柱使用简易方便，在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。

2)样品洗脱后一般pH很低，应立即用碱性中和缓冲液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0） 将收集到的抗体溶液中和到中性，或在收集容器中事先装5%~20%、pH 7-9的缓冲液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液），以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。

3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果，如果已经产生气泡，可以自行重装柱子。

4)通常目标样品洗脱后应继续用0.1 M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（pH 2.0~2.7）洗3~5个柱体积，然后用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上，作简易再生。

5)使用数次后应进行在位清洗，建议用0.1% Triton X-100 37℃洗1-3个柱体积（10~30min），立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上；或70%乙醇洗5个柱体积以上（可保持4~16h），再用平衡缓冲液清洗5柱体积以上；或10mM NaOH洗1-3个柱体积（10-20min），再用平衡缓冲液清洗5柱体积以上。在位清洗能去除强疏水性蛋白质和脂类，恢复柱子的载量和流速。

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